LATE-PCR

El LATE-PCR, Linear-Después-Exponencial Polimerización en Cadena, es una forma avanzada del método PCR asimétrico desarrollada en el laboratorio de Prof. Larry Wang en la universidad de Brandeis en Waltham, MA. En el año 2005, Smiths entró en un acuerdo de licencia exclusiva con la Universidad de Brandeis para la tecnología LATE-PCR y tecnologías relacionadas. Este acuerdo incluyó un codesarrollo de LATE-PCR financiado por Smiths que resultó en un número de otras tecnologías patentadas que comprenden LATE-PCR y están todas exclusivamente licenciadas a Smiths.

El principio básico de LATE-PCR implica la amplificación de sólo una parte de un dúplex de ADN, lo que resulta en una proporción alta de ADN monocatenario que permite la investigación a una gama de temperatura mucho más amplia (y así un grado de multiplexación mayor) que es posible con la PCR simétrica.

El uso de amplicones de ADN monocatenario ofrece una variedad de ventajas:

• La separación de anillamiento y detección (termociclaje más rápido)
• Espacio de temperatura de detección mayor (más ensayos multiplexados)
• Más fácil de diseñar sondas de Tm baja (mayor multiplexación y termociclaje más rápido)
• Aumento considerable en la discriminación de Alelo (mejor integridad de amplificación)
• Disminución considerable en fluorescencia del fondo (mayor sensibilidad)
• Saturación del objetivo, ninguna inhibición de amplificación (termociclaje más rápido y mayor sensibilidad)
• Cinética lineal con poco dispersión entre réplicas que permite el análisis cuantitativo para la discriminación de Alelo (análisis cuantitativo en cualquier punto en la amplificación)


LATE-PCR vuelve más fácil evitar “mispriming sin reducir la eficiencia de amplificación.

LATE-PCR además es aumentado con tecnologías adicionales que mejoran la preparación de muestras, supriman errores de amplificación, mejoran el diseño de sondas para un análisis rápido de alta resolución del producto amplificado, facilitan la multiplexación, permiten la secuenciación de ADN rápida y aumenta el análisis de datos.

Para saber más sobre LATE-PCR y el laboratorio Wangh y la universidad de Brandeis, por favor visite el sitio web http://www.brandeis.edu/projects/wanghlab/


Publicaciones seleccionada
John E Rice, J Aquiles Sanchez, Kenneth E Pierce, Arthur H Reis Jr. Adam Osborne & Lawrence Wangh (2007) Monoplex/multiplex linear-after-the-exponential-PCR assays combined with PrimeSafe and Dilute-'N'-Go sequencing. Nature Protocols, *2, *#10,* *2429-2438

Pierce, K.E., Sanchez, J.A., Rice, J.E., and Wangh, L.J. (2005) Linear-After-The-Exponential (LATE)-PCR: Primer design criteria for high yields of specific single-stranded DNA and improved real-time detection, Proc Natl Acad Sci USA, 102:8609-8614.

Sanchez, J.A., Pierce, K.E., Rice, J.E., and Wangh, L.J. (2004) Linear-After-The-Exponential (LATE)-PCR: An advanced method of asymmetric PCR and its uses in quantitative real-time analysis, Proc Natl Acad Sci USA, 101(7):1933-1938.

 

El gráfico a continuación muestra cómo funciona LATE-PCR: