LATE-PCR

LATE (Linear-After-The-Exponential)-PCR ist eine fortschrittliche Art der asymmetrischen PCR (Polymerase-Kettenreaktion). Es handelt sich um eine Technologie, entwickelt von dem Lawrence Wangh Labor der Brandeis University in Waltham, Massachusetts. Im Jahre 2005 schloss Smiths eine Lizenzvereinbarung mit der Brandeis University und ist seither im Besitz der Exklusivlizenz für LATE-PCR und verwandte Technologien. Die Vereinbarung beinhaltete eine Co-Entwicklung von LATE-PCR, finanziert durch Smiths. Daraus folgte eine Reihe weiterer patentierter Technologien, die LATE-PCR beinhalten - alle in Smiths-Exklusivlizenz.

Das Grundprinzip der LATE-PCR besteht darin, nur eine Seite eines DNA-Doppelstrangs zu amplifizieren und so einen hohen Anteil einzelner DNA-Stränge zu erhalten, so dass eine Sondierung über einen größeren Temperaturbereich (und somit ein höheres Multiplexing) als im Rahmen der symmetrischen PCR möglich wird.

Der Einsatz von Einzelstrang-DNA-Amplifikaten hat noch weitere Vorteile:

• Trennung von Annealing und Detektion (schnelleres Thermocycling)
• Größerer Detektions-Temperaturbereich (mehr Multiplex-Assays)
• Einfachere Erzeugung von Sonden mit niedriger Schmelztemperatur (höheres Multiplexing und schnelleres Thermocycling) 
• Beträchtlicher Anstieg der Allel-Differenzierung (bessere Reinheit der Amplifikation)
• Beträchlicher Rückgang der Hintergrund-Fluoreszenz (höhere Empfindlichkeit)
• Probe/Target-Sättigung - höheres Signal, keine Amplifikationshemmung (schnelleres Thermocycling und höhere Empfindlichkeit)
• Lineare Kinetik mit geringem Scatter unter den Replikaten zur quantitativen Endpunktanalyse

LATE-PCR reduziert Mispriming, ohne die Amplifikationseffizienz zu beeinträchtigen.

LATE-PCR wird weiter verbessert durch zusätzliche Technologien zur Verbesserung der Probenaufbereitung, zur Unterdrückung von Amplifikationsfehlern, zur Verbesserung der Sondenerzeugung zur schnellen hochauflösenden Analyse des amplifizierten Produkts, zur Vereinfachung des Multiplexing, zur schnellen DNA-Sequenzierung und zur verbesserten Datenanalyse.

Erfahren Sie mehr über LATE-PCR, Wangh Laboratory und Brandeis University unter http://www.brandeis.edu/projects/wanghlab/

Ausgewählte Publikationen
John E Rice, J Aquiles Sanchez, Kenneth E Pierce, Arthur H Reis Jr. Adam Osborne & Lawrence Wangh (2007) Monoplex/multiplex linear-after-the-exponential-PCR assays combined with PrimeSafe and Dilute-'N'-Go sequencing. Nature Protocols, *2, *#10,* *2429-2438

Pierce, K.E., Sanchez, J.A., Rice, J.E., and Wangh, L.J. (2005) Linear-After-The-Exponential (LATE)-PCR: Primer design criteria for high yields of specific single-stranded DNA and improved real-time detection, Proc Natl Acad Sci USA, 102:8609-8614.

Sanchez, J.A., Pierce, K.E., Rice, J.E., and Wangh, L.J. (2004) Linear-After-The-Exponential (LATE)-PCR: An advanced method of asymmetric PCR and its uses in quantitative real-time analysis, Proc Natl Acad Sci USA, 101(7):1933-1938.

Die folgende Darstellung zeigt das Funktionsprinzip von LATE-PCR.