LATE-PCR
LATE-PCR ist eine neuartige Form der asymmetrischen PCR, die wesentliche technische Vorteile, verglichen mit der symmetrischen Real-Time-PCR, mit sich bringt und außerdem eine hochwertige Endpunktanalyse ermöglicht.
Das folgende Schema zeigt den Verlauf einer LATE-PCR-Reaktion, verglichen mit einer konventionellen, symmetrischen PCR. LATE-PCR verwendet typischerweise zwei Primer pro Target, einen Überschuss-Primer und einen begrenzenden Primer. Die Konzentrationen sind so gewählt, dass sich der begrenzende Primer während der ersten Stufen der exponentiellen Amplifikation erschöpft, typischerweise um den Ct-Wert einer Echtzeitreaktion.
Entscheidend für die Effizienz der LATE-PCR-Methode ist, dass beim Primer-Design, d.h. beim Aufbau der Primer entsprechend den spezifischen Schmelztemperaturen (Tm), die Primer-Konzentration berücksichtigt wird. Die Primer-Konzentration beeinflusst direkt die Primer-Tm und muss daher in den Primer-Designprozess integriert werden. Nach einer kurzen Phase der exponentiellen Amplifikation werden durch die LATE-PCR-Reaktion Einzelstrang-Amplicone erzeugt.
So ist es möglich, geringe Mengen von Target-Organismen zu detektieren (einstellige Detektionsgrenzen wurden aufgezeigt), Endpunktanalysen durchzuführen, einen deutlichen Anstieg des Multiplexing in einem Assay zu erzielen und, neben der Identifizierung von Bakterien, auch deren Differenzierung auf Stammebene zu erreichen.
Smiths Detection besitzt weltweit auf allen Märkten die Exklusivlizenz für das LATE-PCR-Verfahren der Brandeis University und hat außerdem Lizenzen des Public Health Research Institute und der Firma Biosearch Technologies für die Molecular-Beacons-Sondentechnologie sowie für Fluor/Quencher-Technologien erworben.
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